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    小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GRa)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

    2024/6/4 [98]

    本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GRa)的含量。

    有效期:6個(gè)月

    保存條件:2-8℃

    小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GRa)試劑盒組成:

    圖片1.png

    備注:

    1.(96T/48T)打開(kāi)包裝后請及時(shí)檢查所有物品是否齊全。

    2. 標準品濃度依次為:800、400、200、100、50、25 pg/mL

    3. 經(jīng)過(guò)大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實(shí)驗過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過(guò)大標準品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標本進(jìn)行適當稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗。

    檢測前準備工作:

    1.請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

    2.從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正?,F象;放置室溫,輕搖均勻,待結晶溶解后再配置洗滌液??蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,未用完的放回4℃

    3.20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

    實(shí)驗原理:

    試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GRa)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GRa)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

    實(shí)驗所需自備試驗器材:

    1.酶標儀(450nm)

    2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

    3.37℃恒溫箱

    4.蒸餾水或去離子水

    樣本處理及要求:

    1.血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    2.血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    3.組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會(huì )影響測量結果),稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實(shí)驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

    4.細胞培養物上清:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

    5.其它生物標本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測。

    6.樣品外觀(guān):樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除。

    7.樣品保存:樣品收集后若在1周內進(jìn)行檢測的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內檢測),或-80℃(6個(gè)月內檢測),避免反復凍融,標本溶血會(huì )影響檢測結果,因此溶血標本不宜進(jìn)行此項檢測。

    小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GRa)試劑盒注意事項:

    1.嚴格按照規定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

    2.洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。

    3.消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

    4.底物顯色液應呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

    5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

    6.在儲存和溫育時(shí)避免強光直接照射。

    7.平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

    8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會(huì )破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

    9.不能使用過(guò)期產(chǎn)品。

    10.如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

    操作步驟:

    1.從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。

    3.樣本孔中a加入待測樣本50μL;空白孔不加。

    4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

    6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

    實(shí)驗結果計算:

    繪制標準曲線(xiàn):在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn),按曲線(xiàn)方程計算各樣本濃度值。

    圖片2.png

    (此圖僅供參考)

    性能:

    1. 檢測范圍:25 pg/mL – 800 pg/mL。

    2.靈敏度:檢測濃度小于1.0 pg/mL。

    3.特異性:不與其它可溶性結構類(lèi)似物交叉反應。

    4.重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。

    小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GRa)試劑盒技術(shù)小提示:

    1.當混合或重溶蛋白溶液時(shí),盡量避免起沫。

    2.為了避免交叉感染,配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。

    3.每次孵育時(shí),請正確使用封板膠可保證結果的準確性。

    4.混合后的顯色底物在上板前應為無(wú)色,請避光保存;假如微孔板后,將由物色變成不同深度的藍色。

    5.終止液上板順序應同顯色底物上板順序一致;加入終止液后,孔內顏色由藍變黃;若孔內有綠色,則表明孔內液體未混勻;請充分混合。

    說(shuō)明:

    1.由于現有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。

    2.實(shí)驗結果與試劑的有效性、實(shí)驗者的相關(guān)操作以及當時(shí)的實(shí)驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準備充足的標本備份。

    3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì )有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請依據試劑盒內說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗操作,網(wǎng)站電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考。

    4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實(shí)驗說(shuō)明才會(huì )得到佳的檢測結果。

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